一种针对人体皮肤组织快速、低毒的石蜡切片新方法

石蜡切片是组织学研究中重要的实验技术，主要用于镜下观察细胞形态结构，在病理学和法医学等领域扮演者十分重要的角色，为很多临床和医学科研做出过重大贡献。石蜡切片主要步骤为：标本采集、取样、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、烘片、染色、封片等[1]。后续还针对石蜡切片发明了原位杂交等一系列切片分析技术。然而，要做好石蜡切片，达到完全展现样本特点而又不因切片操作使其失真的要求，还是需要很多方面的注意。针对不同的组织，需要有不同细节的特定方法，才能有更好的针对性，从而更好的展现组织样本的展现样本特点而又不因切片操作使其失真[2-4]。目前石蜡切片制作时还存在一些

问题，如切片操作时间过长、固定液的效果不佳，封片溶液毒性过大等问题。本实验室主要针对人体皮肤组织做出了一系列改良。一方面使得整个操作的毒性降低，实验室工作环境可以更安全；另一方面由于使用了自动化机器使得整个HE切片染色的步骤可以在较短时间内完成。

1 资料与方法

1.1 一般资料：生物样本采用成年人包皮环切术所切下包皮。

1.2 方法： ① 取样： 控制皮肤组织样品的大小为长× 宽≤20 mm×20mm，厚度≤3 mm。②固定：无论传统方法还是新方法均使用pH值7.4的4%甲醛溶液进行固定。新老方法额区别在于：传统方法条件为4℃，固定时间为24 h；新方法将固定液置于37℃温箱，固定时间为1 h。③脱水，透明和浸蜡：传统方法这三步采用手动处理，新方法使用Leica TP1020型脱水机，自动进行。④包埋：对于包埋，新方法与传统方法无区别。⑤切片：对于切片，传统的切片使用手动转动的切片机。本实验的切片机以1次/s的频率自动切片，厚度为5μm。⑥展片：对于展片，本实验室经过摸索后发现适用皮肤的展片时间为45℃的水中展开90～120 s。⑦染色：在传统的染色中需要使用二甲苯来脱蜡，以利于随后的染料进入细胞结构中。本实验室使用甲级环己烷的溶液进行脱蜡，代替了传统的甲级环己烷。⑧封片：这一步骤，传统方法使用中性树胶封片。封片后需要晾制，如果需要封片后快速观察，则需要在通风厨内使用显微镜观察。晾晒时间至少需要48 h，才可使中性树胶不至于具有强烈的毒性。新方法使用CVmount，封片后在通风橱内晾制1 h即可镜下观察。

2 结果

2.2 两种制片方法的时间：①两种方法在固定步骤上所需的时间：传统方法4℃，24 h，4%甲醛溶液（pH值7.4）；新方法37℃，1 h，4%甲醛溶液（pH值7.4）。②两种方法在脱水透明浸用，且挥发性较二甲苯更小[5]。二甲苯可经呼吸道、皮肤及消化道吸收，其蒸气可引起眼、鼻、喉的刺激，高浓度时可致严重的

呼吸困难，甚至死亡。此外，吸入高浓度的二甲苯可使食欲丧失、恶心、呕吐和腹痛，有时可引起肝肾可逆性损伤。长期接触可使神经系统功能紊乱[6]。而且二甲苯对于女性有特殊的伤害：有新闻报道称，从事与二甲苯长期接触的职业的女性出现原因不明的月经障碍、自然流产、死胎及胎儿先天疾患[7]。对动物所做研究表明，二甲苯对小鼠具有一定的胚胎毒性，表现为胚胎体重下降、发育迟缓和吸收胎增加，但未见致畸性[8]。综上所述，本实验室采用真空负压脱水机替代手动操作，减少了石蜡切片实验需要的时间。采用甲级环己烷替代二甲苯，降低了实验对人员的毒性，且制作出的石蜡切片与传统方法在质量上无明显区别。

4 参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部.工业企业设计卫生标准[M].北京:人民卫生出版社,1979:1112.

[2] 郭海燕.如何提高甲状腺、淋巴结、乳腺快速冰冻切片质量分析[J].中国实用医学,2009,4(28):207.

[3] 章克苹,周 莹,龙 飞.不同组织冰冻切片的制作方法[J].江西医学院学报,2006,46(4):13.

[4] 王海萍.电灼伤死亡患者皮肤病理切片的制作[J].现代学,2009,21(3):269.

[5] 李 玲,王文东,栗学军,等.低浓度苯和甲苯及二甲苯对作业人员健康及血清中超氧化物歧化酶的影响[ J ] . 工业卫生与职病,2003,29(4):238.

[6] 王韶艳,李 莉,李 艳.药物安全性评价中病理技术人员个人防护[J].齐鲁药事,2010,29(1):4.

[7] 王秀玲.二甲苯毒理学研究进展[J].国外医学·卫生学册,1997,24(2):77.

[8] 吕丹瑜,刘雅琼,刘 宁,等.二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的毒性作用[J].解剖学报,2006,37(3):355.