一种复方消毒喷雾剂对印模及石膏的消毒效果观察

随着对口腔医疗过程中感染性病菌传播途径认识的不断提高，人们越来越关注口腔门诊与技工室的消毒问题。研究表明，藻酸盐印模表面可滞留、吸附病毒[1]；同时微生物可经印模污染石膏模型、技师甚至打磨、抛光设备等，从而引起交叉感染[2]。目前国内尚没有一种口腔印模及模型的常规消毒方法，多数医生也从未对印模消毒。本研究研发一种以三氯羟基二苯醚为主要成分的复方消毒喷雾剂，并评价其对印模和石膏的消毒效果，以探索一种适合印模及模型消毒的方法。
1  材料和方法

1.1  实验菌株 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC25923；大肠杆菌（Escherichia coli）ATCC 25922；白假丝酵母菌（Saccharomyces albicans）ATCC 10231；变异链球菌（Streptococcus mutans）ATCC 25175；枯草杆菌黑色变种芽孢（black spore variants of Bacillus subtilis）ATCC 9372。以上菌株由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供。

1.2  菌悬液制备 挑取4～14代菌苔接种于相应培养基在36 ℃恒温箱中培养24～72 h，涂片检查为纯培养后用含1%蛋白胨的pH 7.2的0.03 mol?L-1磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）作为稀释液，使用CrystalTM Spec比浊仪配成为1×108 cfu?mL-1菌悬液后按照《消毒技术规范（2002年版）》[3]用稀释液稀释为不同质量浓度的菌悬液备用。

1.3  消毒液制备 用20%乙醇、50%丙二醇、1％聚乙二醇和29％去离子无菌蒸馏水配制成溶剂，加入三氯羟基二苯醚原粉配制成300、600、1 200、1 800、2 400、3 000、5 000 mg?L-1复方消毒喷雾剂进行微生物杀灭及影响因素实验。

1.4  载体制备 载体分为藻酸盐印模载体和超硬石膏载体2种，均制成5 cm×4 cm×1 cm无菌块。

1.5  中和剂选择实验 按照《消毒技术规范（2002年版）》[3]的要求，设6个实验组进行中和剂选择实验。

1.6  杀灭实验

1.6.1  实验分组  首先根据消毒剂分为实验组和对照组2个大组，其中实验组包括不同质量浓度的复方消毒喷雾剂，对照组包括5 000 mg?L-1碘伏喷雾对照组（中光牌，成都洗消剂厂）、阳性对照组、阴性对照组和空白对照组。再根据载体分为藻酸盐印模组和超硬石膏组；根据实验菌株分为金黄色葡萄球菌组、大肠杆菌组、白假丝酵母菌组、变异链球菌组和枯草杆菌黑色变种芽孢组；根据消毒时间分为5、10和15 min组。

1.6.2  实验方法  1）染菌：将印模和石膏模型无菌处理后，在表面分别均匀涂布金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白假丝酵母菌、变异链球菌和枯草杆菌黑色变种芽孢悬液。2）消毒液喷涂：喷雾瓶喷嘴距离样品10 cm，以每秒1次的频率喷涂5次，喷涂压力保持一致。3）中和剂处理：吸取5 mL中和剂冲洗印模表面，石膏模型不用中和剂处理。4）取样和培养：将模型表面直接覆于培养基表面，以0.196 N力按压1 min后取下样品。将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白假丝酵母菌、枯草杆菌黑色变种芽孢置于36 ℃恒温需氧培养箱中培养18～24 h，变异链球菌置于厌氧培养箱中培养48～72 h，然后进行菌落形成单位计数，计数3次取平均值。

1.6.3  结果判定  以杀灭对数值（killing logarithm value，KL）作为消毒效果的评价指标。计算方法如下：KL=碘伏对照组平均活菌浓度的对数值－实验组活菌浓度对数值。

1.7  统计分析 采用SPSS 12.0软件对数据进行Wilcoxon符号秩检验。

2  结果

2.1  中和剂实验 中和剂实验表明，含1.0％甘氨酸、1.0％卵磷脂、3.0％吐温-80、0.5％硫代硫酸钠的PBS能有效中和1 800 mg?L-1三氯羟基二苯醚消毒液和5 000 mg?L-1碘伏消毒液。

2.2  消毒液的消毒效果 复方消毒喷雾剂及碘伏消毒液对细菌的消毒效果见表1和表2。
从表1和表2可以看出，3 000 mg?L-1复方消毒喷雾剂作用10 min以上可以有效杀灭印模和石膏表面的所有微生物（KL≥3.00），达到消毒技术规范中对高效消毒剂的消毒效果要求；1 200 mg?L-1复方消毒喷雾剂作用10 min以上可以有效杀灭印模和石膏表面的除枯草杆菌黑色变种芽孢外的其他4种细菌，达到消毒技术规范中对中效消毒剂的消毒效果要求。统计分析表明，600 mg?L-1复方消毒喷雾剂与5 000 mg?L-1碘伏消毒液对5种微生物的杀灭效果无统计学差异（P＝0.128）；在作用时间相同情况下，同质量浓度消毒液对印模和石膏表面的消毒效果有统计学差异（P＝0.000），对印模表面的消毒效果要优于石膏表面。印模和石膏表面细菌敏感性两两比较结果见表3。从表3可以看出，印模表面金黄色葡萄球菌对消毒剂的作用最为敏感，其次为白假丝酵母菌，大肠杆菌和变异链球菌敏感性排第3，枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭难度最大。石膏表面各细菌敏感性和印模表面表现基本一致，金黄色葡萄球菌最易杀灭，而枯草杆菌最难杀灭，白假丝酵母菌、变异链球菌和大肠杆菌之间无统计学差异。

3  讨论
目前临床上最常使用的印模材料有藻酸盐、硅橡胶和琼脂印模材料。硅橡胶印模材料制取的印模精确度高、化学稳定性好，是目前印模材料中最理想的一类。然而，由于我国基本国情水平限制，目前，国内临床使用最为普遍的印模材料并非硅橡胶，而是藻酸盐印模材料。藻酸盐和琼脂印模材料是一种弹性水胶体材料，为了保证水胶体印模材料的准确性，既不能高温灭菌使其脱水，也不能长时间浸泡使其膨胀。研究[4]表明，使用喷涂法可以达到比较理想的消毒效果。藻酸盐印模在喷涂消毒后无明显形变, 对各类修复体尺寸精度影响最小，而浸泡消毒则会导致显著形变。同样，由于石膏模型和代型也需保持精确的形状和强度，因而对于消毒方法的选择，不仅要考虑消毒方法的杀菌效果，还要考虑其对精度和表面物理性能的影响。一种消毒方法要达到高的消毒效能，除要求消毒剂自身有强的灭菌能力外，还要求其能与细菌充分接触，在局部达到并维持尽可能高的浓度[5]。尽管喷雾消毒的方法在一定程度上降低了对印模和模型精度和强度的影响，但是由于印模和模型表面结构复杂，要达到完全消毒的目的，就要求消毒剂本身具备以下特点：1）高效、快速、广泛的与细菌结合；2）广谱抗菌的能力；3）使用浓度低；4）具备较高的生物安全性，对人体皮肤及黏膜无刺激；5）不着色，易去除；6）长期放置不分解，稳定性好。三氯羟基二苯醚是一种白色结晶粉末，略具芳香味，化学性质稳定，耐高温，耐酸碱水解，是一种低毒、高效、广谱的酚类抗菌剂，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、酵母及病毒等均具有广泛的杀灭和抑制作用。三氯羟基二苯醚的主要作用部位是细菌的胞浆膜，抑菌浓度时可阻止细菌对必需氨基酸的摄取，杀菌浓度时可使细菌胞浆膜破坏，细胞内容物外溢[6]。DeSalva等[7]研究显示，三氯羟基二苯醚可以被包括人在内的物种耐受，在建议用量下对人体绝对安全，同时对生态环境亦具有高度的安全性。在一般条件下，三氯羟基二苯醚水溶液具有优异的储存稳定性、良好的水解稳定性及很低的挥发性。

对消毒剂、消毒方式的评价实验，按目的可分为3期[8]：第1期是实验室实验，用以测定一种制剂是否有抗微生物作用；第2期在实验室内模拟实际情况，以检验消毒程序；第3期是进行现场实验，因其标准化实验条件难以实现，故不常用。本部分研究属第2期。研究结果显示，3 000 mg?L-1复方消毒喷雾剂作用10 min以上可以有效杀灭印模和石膏表面的所有微生物（KL≥3.00），达到消毒技术规范中对高效消毒剂的消毒效果要求；1 200 mg?L-1的消毒液作用10 min以上可以有效杀灭印模和石膏载体上除枯草杆菌黑色变种芽孢外的其他4种细菌，达到消毒技术规范中对中效消毒剂的消毒效果要求。本实验采用5 000 mg?L-1碘伏消毒液作为对照组，碘伏具有中效、低毒的优点，对细菌繁殖体、结核杆菌及真菌、病毒有一定的灭活作用，对细菌芽孢仅有抑制作用。目前国内比较倾向于使用碘伏喷雾对印模及石膏进行消毒，但是碘伏消毒液也具有易黄染、对金属托盘有腐蚀性、可能造成托盘与印模分离及40 ℃以上不稳定等缺点。从本实验结果可看出，在载体和作用时间相同的情况下，含600 mg?L-1三氯羟基二苯醚的复方消毒液与5 000 mg?L-1碘伏消毒液对以上5种微生物的杀灭对数值差异无统计学意义

（P＝0.128），可以认为含600 mg?L-1三氯羟基二苯醚的复方消毒液与5 000 mg?L-1碘伏消毒液对以上5种微生物的杀灭效果无明显差异，这说明在同样载体同等时间前提下，三氯羟基二苯醚消毒喷雾剂的有效质量浓度低于碘伏消毒喷雾剂。本研究还表明，在作用时间相同的情况下，同质量浓度消毒液对印模和石膏表面的消毒效果有统计学差异（P＝0.000），同种消毒液作用相同时间对印模表面消毒效果要优于石膏表面。造成这一结果可能有2个原因，其一在于石膏和印模本身具有不同的化学和物理性质，石膏表面存在较多孔隙，吸水性较强，喷涂的消毒液比较容易流失；而藻酸盐印模表面较为光滑，消毒液有条件充分接触印模表面的细菌。其二在于消毒液配方的特异性。基于三氯羟基二苯醚特殊的杀菌原理，其抗菌效果可在不同的配方中被增强或削弱[9]。本实验消毒液配方中以1,2-丙二醇与乙醇的混合物作为复方溶剂，既有效地溶解了三氯羟基二苯醚，又降低了醇溶液在消毒剂中占有的体积分数。这样配置一是克服了乙醇因易挥发的特性而对印模材料带来潜在的脱水作用，二是避免了高浓度丙二醇可能存在的皮肤刺激性，同时较低浓度的丙二醇还是一种良好的保湿剂，可以在一定时间内维持印模的表面湿度在较高水平，延缓了藻酸盐印模发生渗润和凝溢的时间，为消毒剂争取到宝贵的作用时间，同时本配方通过表面活性剂对印模表面张力的降低作用，促使消毒剂更加快速广泛地与细菌相结合，进一步提高了杀菌效力，提高了对印模表面的消毒效果。

【参考文献】

1 Powell GL, Runnells RD, Saxon BA, et al. The presence andidentification of organisms transmitted to dental laboratories[J]. JProsthet Dent, 1990, 64（2）：235-237.

2 Gerhardt DE, Sydiskis RJ. Impression materials and virus[J]. JAm Dent Assoc, 1991, 122（5）：51-54.

3 中华人民共和国卫生部. 消毒技术规范（2002年版）[S]. 北京：中华人民共和国卫生部, 2002：15-43. Ministry of Public Health of the People′s Republic of China.Technical standard for disinfection（2002 edition）[S]. Beijing：Ministry of Public Health of the People′s Republic of China,2002：15-43.

4 Vischer WA, Reg?觟s J. Antimicrobial spectrum of Triclosan, a broad-spectrum antimicrobial agent for topical application[J]. Zen-tralbl Bakteriol Orig A, 1974, 226（3）：376-389.

5 赵瑚, 郑弟泽, 洪亮. 5种消毒方法对染菌口腔印模消毒效果的比较[J]. 华西口腔医学杂志, 2000, 18（5）：332-334.ZHAO Hu, ZHENG Di-ze, HONG Liang. The disinfection effi-ciency comparison of different treatments on dental impressionand gypsum casts[J]. West China J Stomatol, 2000, 18（5）：332-334.

6 Gaffar A, Nabi N, Kashuba B, et al. Antiplaque effects of den-tifrices containing triclosan/copolymer/NaF system versus triclosandentifrices without the copolymer[J]. Am J Dent, 1990, 3（Spec）：S7-S14.

7 DeSalva SJ, Kong BM, Lin YJ. Triclosan： A safety profile[J].Am J Dent, 1989, 2（Spec）：185-196.

8 薛广波． 实用消毒学[M]． 北京： 人民军医出版社, 1986：91.XUE Guang-bo. Practical disinfection[M]. Beijing： People′s Mi-litary Medical Press, 1986：91.

9 李刚, 周巧娟, 罗勇. 三氯新在含漱液中的配伍和应用效果研究进展[J]. 口腔材料器械杂志, 2004, 13（3）：145-148.LI Gang, ZHOU Qiao-juan, LUO Yong. Progress in the study ofcompatibility of medicines and effectiveness of application of tri-closan in mouthrinses[J]. Chin J Dent Materials Devices, 2004,13（3）：145-148.