非糖基化尿激酶原突变体的研究

杨波,李天德,王广义,陈练

知网,万方

目的：构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体，在CHO-dhfr-（二氢叶酸还原酶缺陷型-中国仓鼠卵巢）细胞中表达，收取无血清培养上清，并鉴定其活性。方法：使用PCR扩增的方法，将302位天冬酰胺（Asn302）突变为丙氨酸（Ala302），去掉糖基化位点；将156位精氨酸（Arg156）突变为赖氨酸（Lys156），去掉凝血酶作用位点。将突变体基因转染到CHO-dhfr-细胞中。收取无血清培养上清，并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性。结果：PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子量略大于1 200道尔顿(da。